GB/T 28769-2012 脂肪酸甲酯中游离甘油含量的测定 气相色谱法
本标准规定了采用气相色谱法测定脂肪酸甲酯（FAME）中质量分数范围 0.005%～0.07% 的游离甘油含量的方法。
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适用范围
本标准规定了采用气相色谱法测定脂肪酸甲酯（FAME）中质量分数范围 0.005%～0.07% 的游离甘油含量的方法。 1.2 本标准适用于评价纯态生物柴油的脂肪酸甲的质量。甘油作为交换反应的副产物，其浓度会影响燃料的性能。 不适用：现有资料未提供（除 11.1 指出精密度值不适用于超出附录 A 所列试样类型和浓度范围的试样测试外，未列明其他不适用情形）。
方法原理
方法概要：将乙醇、水和正己烷及一定量的内标物加入到已知量的试样中，使混合物形成两相。游离甘油定量转移至下层溶液中。采用气相色谱法测定下层溶液以定量确定游离甘油的含量。
主要仪器
具备下列配置的气相色谱仪： 6.1.1 色谱柱箱：设定温度的控制精度 ±1 ℃〔原文不清〕）。 6.1.2 进样口：分流/无分流进样口或填充柱进样口。 6.1.3 火焰离子化检测器（FID）及信号转换/放大系统。 6.1.4 记录仪/积分仪，能够与信号转换/放大系统连接使用，最大响应时间小于 1 s〔原文不清〕），绘图速度可以调节。 6.1.5 毛细管色谱柱：类型为 PoraPLOT Q，长度 10 m，内径 0.32 mm，液膜厚度 10 μm〔原文不清〕）；或采用固定相 CHROMOSORB 101〔原文不清〕），内径 4 mm，长度 1 m 的填充柱。采用的色谱柱应满足甘油和内标物的色谱峰完全分离（两色谱峰之间的基线接近零点），分析时间小于 15 min，并且按照 9.3 测定得到的甘油的校正因子不超过 2.5。 注：已注意到不同生产商所提供的毛细管色谱柱的性能存在差别，有些在使用中会带来一些问题。有人提出使用游离脂肪酸分析用固定相（FFAP）或聚乙二醇固定相的毛细管色谱柱。无论使用何种类型色谱柱，其分离效果需满足指标要求。 6.1.6 流量控制器，用于载气和辅助气流量控制。 6.2 气相色谱用微量注射器：5 μL 或 10 μL〔原文不清〕）。 6.3 容量瓶：50 mL 和 100 mL。 6.4 移液管：1 μL〔原文不清〕）。 6.5 带刻度移液管：5 mL〔原文不清〕）。 6.6 分析天平：感量 1 mg。 6.7 玻璃锥形离心试管：10 mL。 6.8 离心机：转速可达到 2000 r/min〔原文不清〕）。
试剂与标准物质
通则：如非特别说明，所有试剂均为分析纯。 5.1 正己烷。 5.2 1,4-丁二醇：纯度不低于 99%。 5.3 乙醇：纯度不低于 95%。 5.4 甲酸：纯度不低于 99%。 5.5 甘油：纯度不低于 99%。 5.6 载气：氦气或氢气，符合气相色谱载气要求，一般纯度不低于 99.99%。 5.7 辅助气体： 氢气：纯度不低于 99.99%，不含水和有机化合物； 空气：干燥空气，不含有机化合物。 5.8 内标物溶液：在 100 mL 容量瓶中准确称量约 80 mg（精确至 0.1 mg）1,4-丁二醇，用少量蒸馏水溶解，加入 1 mL 甲酸，用蒸馏水稀释至刻度。按此步骤制备的溶液在室温下可以稳定存放 24 h。
关键条件
毛细管柱可使用下列条件： 不分流模式： a）色谱柱箱温度：初温 150 ℃，保持 1 min，升温速率 40 ℃/min，终温 210 ℃，保持 12 min； b）进样口温度：250 ℃； c）检测器温度：250 ℃； d）进样 0.5 min 后打开分流阀，分流比约 20:1〔原文不清〕）； e）载气流量：3 mL/min。 分流模式： a）色谱柱箱温度：210 ℃； b）进样口温度：230 ℃； c）检测器温度：250 ℃； d）分流比：约 50:1〔原文不清〕）； e）载气流量：1 mL/min～2 mL/min。 9.1.2 填充柱可使用下列条件： 色谱柱箱温度：200 ℃； 进样口温度：230 ℃； 检测器温度：250 ℃； 载气流量：20 mL/min～30 mL/min。 注：推荐采用毛细管柱的不分流进样模式色谱条件以保证测定的灵敏度。
计算与结果
定性：见 9.2，根据相同条件下甘油和内标物的保留时间确定色谱峰。 甘油校正因子 F 计算（式 1）： F = (A2/M2) / (A1/M1)〔原文不清〕”，分式结构〔待核〕（〔原文不清〕）） 式中： A1——1,4-丁二醇峰面积； A2——甘油峰面积； M1——溶液中 1,4-丁二醇的质量，单位为毫克（mg）； M2——溶液中甘油的质量，单位为毫克（mg）。 游离甘油质量分数计算（式 2）： w =（A2/A1）× F ×（m1/m）× 100% 式中： A1、A2、F——与式（1）中含义相同； m1——试样中加入的 1,4-丁二醇的质量，单位为毫克（mg）； m——试样的质量，单位为毫克（mg）。 结果表示：以质量分数（%）表示，精确至小数点后第 2 位。
质量控制
实验室间精密度详细测定数据见附录 A。据此得出的精密度值不适用于超出所列试样类型和浓度范围的试样测试。按照下述规定判断试验结果的可靠性（95% 置信水平）。 11.2 重复性（r）：同一实验室、同一操作人员、采用同一仪器设备，在相同的实验条件下，对同一试样两次重复测定结果之差不应超过表 1 中重复性（r）的值。 11.3 再现性（R）：不同实验室、不同操作人员、采用不同仪器，对同一试样两个单一和独立测定结果之差的绝对值，不应超过表 1 中再现性（R）的值。 表 1 测定重复性和再现性（r 和 R）： 重复性：r = 0.466 4w − 0.0012 再现性：R = 0.781 2w + 0.0032 注：w 为两个测定结果的平均值，质量分数（%）。 附录 A（资料性附录）实验室间试验结果： 实验室协作试验涉及欧洲范围 5 个国家 7 个实验室对 5 个试样的分析结果。 试样 1：由葵花籽油制备的脂肪酸甲酯。 试样 2：由菜籽油制备的脂肪酸甲酯 1。 试样 3：由菜籽油和葵花籽油混合制备的脂肪酸甲酯（75:25）。 试样 4：由菜籽油制备的脂肪酸甲酯 2。 试样 5：由菜籽油和葵花籽油混合制备的脂肪酸甲酯（25:75）。 本试验项目由欧洲标准化委员会 CEN/TC 307/WG1 工作组于 1999 年组织进行，获得的试验结果按照 ISO 4259 的要求进行统计分析。 表 A.1 精密度数据〔原文不清〕）： 参加的实验室数目/N：7（试样 1～4），原文试样 5 对应值〔待核〕（〔原文不清〕） 去除界外实验室后的实验室数/N：6（原文列示），对应试样〔待核〕（〔原文不清〕） 测定平均值（质量分数）/%：0.018、0.014、0.032、0.001、0.048（原文列示，对应试样〔待核〕（〔原文不清〕）） 重复性测定标准偏差（质量分数）/%：0.001、0.001、0.005、0.000、0.006（原文列示，对应试样〔待核〕（〔原文不清〕）） 再现性测定标准偏差（质量分数）/%：0.003、0.004、0.007、0.002、0.012（原文列示，对应试样〔待核〕（〔原文不清〕）） 重复性允许差（质量分数）r/%：0.004、0.004、0.018、0.001、0.020（原文列示，对应试样〔待核〕（〔原文不清〕）） 再现性允许差（质量分数）R/%：0.011、0.015、0.025、0.006、0.042（原文列示，对应试样〔待核〕（〔原文不清〕））
引用文件
GB/T 4756 石油液体手工取样法（GB/T 4756—1998, eqv ISO 3170:1988） GB/T 15687 动植物油脂 试样的制备（GB/T 15687—2008, ISO 661:2003, IDT） 参考：EN 14106：2003（修改采用）；ISO 4259（附录 A 统计分析引用）；GB/T 1.1—2009（前言，起草规则）
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