SH/T 0796-2007 B-100生物柴油脂肪酸甲酯中游离甘油和总甘油含量测定法（气相色谱法）
适用于采用气相色谱法测定 B-100 生物柴油脂肪酸甲酯中游离甘油和总甘油含量（1.1）。
证据说明：本页内容依据起源标物库内该标准原文整理（标注「〔待核〕」处为 〔原文不清〕），个别数值与现行状态请以标准原页和产品证书为准。
适用范围
适用于采用气相色谱法测定 B-100 生物柴油脂肪酸甲酯中游离甘油和总甘油含量（1.1）。 游离甘油检测范围：0.005%（质量分数）~0.05%（质量分数）（1.1）。 总甘油检测范围：0.05%（质量分数）~0.5%（质量分数）（1.1）。 不适用于由含有较多十二烷酸甘油酯的植物油（如椰子油和棕榈核油，原文作"棕相核油"，〔待核〕（〔原文不清〕））合成的生物柴油中游离甘油和总甘油含量的测定（1.1）。 采用国际单位制［SI］单位（1.2）。 标准涉及某些安全问题，但未对所有安全问题提出建议；用户使用前有责任建立适当的安全保健措施并确定适当的规章制度（1.3）。
方法原理
样品经 N-甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺（MSTFA）硅烷化后，采用气相色谱法分析。定量过程采用双内标和四种参比物对结果进行校正。单脂肪酸甘油酯、二脂肪酸甘油酯和三脂肪酸甘油酯的测定分别采用单油酸甘油酯、二油酸甘油酯和三油酸甘油酯作为标准参考物。利用平均转化因子计算试样中键合甘油的含量（第4章）。
主要仪器
气相色谱仪系统（6.1）：参阅 GB/T 4946 详细的名称和定义。 气相色谱仪：仪器配置必须能满足表1所规定的色谱分析条件的要求（6.1.1）。 色谱柱：5%苯基二甲基聚硅氧烷交联键合固定相或100%二甲基聚硅氧烷固定相的开管柱，柱子最高使用温度可达400℃（原文作"400T"，〔待核〕（〔原文不清〕））。柱长10 m或15 m，内径0.32 mm，液膜厚度0.1 μm（原文作"0.1wm"，〔待核〕（〔原文不清〕））的色谱柱可获得良好分离效果。具有相同或更好柱效选择性的其他色谱柱也可使用。建议使用2 m~5 m长、内径0.53 mm的高温色谱柱接在分析柱之前与进样口相连，以使用自动进样器并延长柱子使用寿命（6.1.2）。 电子数据采集系统（6.2）： 积分仪或计算机：能够实现实时绘图和色谱数据转换，自动积分测量色谱峰的面积和保留时间（6.2.1）。 数据处理系统可以实施多级内标校正运算过程，计算校正曲线的相关系数，并采用内标法对数据进行处理（6.2.2）。
试剂与标准物质
试剂纯度：所用试剂均为分析纯；其他级别试剂也可使用，必须保证不会降低分析精度（7.1）。 正庚烷：分析纯（7.2）。 N-甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺（MSTFA）：分析纯（7.3）。 吡啶：分析纯（7.4）。 载气：使用高纯度氢气、氦气或氮气（原文作"氢气、氢气或氮气"，〔待核〕（〔原文不清〕）），纯度大于99.99%；净化载气使用分子筛或其他吸附剂去除水分、氧气和烃类杂质，选用载气压力要保证载气流速（7.5）。 微升注射器或移液器：容量为100 μL 和 250 μL（7.6）。 带盖样品瓶：带聚四氟乙烯密封垫，容量2 mL 和 10 mL（7.7）。 容量瓶：10 mL、25 mL、50 mL（7.8）。 校正标样制备（9.1）：按表2所列制备标样，在容量瓶中称量纯组分质量，准确至0.1 mg，用吡啶稀释至刻线，配好的标准溶液置于冰箱中保存备用。 表2 各组分储备溶液（原文表头及部分内容 〔原文不清〕严重，以下为可辨识内容，〔待核〕（〔原文不清〕））： | 化合物 | CAS号 | 称量质量 mg | 稀释体积 mL | |---|---|---|---| | 甘油 | 56-81-5 | 25 | 50 | | 单油酸甘油酯 | 111-03-5 | 50 | 10 | | 二油酸甘油酯 | 2465-32-9 | 50 | 10 | | 三油酸甘油酯 | 122-32-7 | 50 | 25 | | 1,2,4-丁三醇（内标1） | 820-36-6 | 25 | 10 | | 正十五烷（替代内标1） | 621-7-6（〔待核〕（〔原文不清〕）） | 20 | 10 | | 三癸酸甘油酯（内标2） | 现有资料未提供 | 80 | 现有资料未提供 | 混合标样制备（9.2）：按表3所列量，用微量注射器或移液器移取规定体积校正标样于10 mL带盖样品瓶中，制备五种混合标准溶液。向五种标准溶液中分别加入100 μL MSTFA，盖上瓶盖摇动，室温下静置15 min~20 min，加入约8 mL正庚烷，摇匀备用。 表3 标准溶液（体积单位：μL，〔原文不清〕严重，〔待核〕（〔原文不清〕））： | 标准溶液编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |---|---|---|---|---|---| | 甘油体积 | 10 | 30 | 70 | 100 | 现有资料未提供 | | 单酸甘油酯体积 | 20 | 50 | 160（〔待核〕） | 150（〔待核〕） | 200 | | 二油酸甘油酯体积 | 30 | 40（〔待核〕） | 70 | 100 | 现有资料未提供 | | 三油酸甘油酯体积 | 10 | 20 | 40（〔待核〕） | 70 | 100 | | 1,2,4-丁三醇 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | | 正十五烷 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | | 三癸酸甘油酯 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
关键条件
表1 色谱分析条件（〔原文不清〕严重，〔待核〕（〔原文不清〕））： | 条件 | 条件1 | 条件2 | |---|---|---| | 进样口 | 冷柱头柱上进样口 | 冷柱头柱上进样口 | | 进样量 | 1 μL | 1 μL | | 色谱柱升温程序-初温 | 50℃保持1 min | 70℃保持1 min | | 一阶 | 升温速率15℃/min到180℃ | 升温速率15℃/min到190℃ | | 二阶 | 升温速率7℃/min到230℃ | 升温速率7℃/min到260℃ | | 三阶 | 升温速率30℃/min到380℃，保持10 min | 升温速率30℃/min到380℃，保持10 min | | 检测器 | 火焰离子化检测器（FID） | 火焰离子化检测器（FID） | | 检测器温度 | 380℃ | 380℃ | | 载气类型 | 氮气或氦气（原文作"氮气或氫气"，〔待核〕（〔原文不清〕）） | 氮气 | | 流量 | 3 mL/min（50℃时） | 2 mL/min（50℃时） |
计算与结果
校正标样测定采用与样品测定相同的色谱条件进行分析。向冷柱头柱上进样口注入1 μL混合标样的硅烷化产物并开始采集，得到色谱图和积分报告。对每一种参比物，按式（1）和（2）计算响应值之比（rspi）和质量比（amti）（9.4.1）： rspi = (Ai/Ais)（1），式中 Ai—参比物的面积，Ais—内标的面积。 amti = (Wi/Wis)（2），式中 Wi—参比物的质量（mg），Wis—内标的质量（mg）。 以 rsp 作 y 轴，amt 作 x 轴绘制每一种参比物的标准曲线。 按式（3）计算每一种参比物的相关系数 r²。相关系数 r² 应不小于0.99，如果计算的 r² 低于此值，检查仪器的参数和硬件配置并重新运行校正过程（9.4.2）。式（3）（4）（5）原文公式内容 〔原文不清〕严重，〔待核〕（〔原文不清〕）。 标准曲线方程：每种参比物的标准曲线方程用式（6）表示（9.4.3）： Wi/Wis = a × (Ai/Ais) + b（6） 式中：Wi—参比物的质量（mg）；Wis—内标的质量（mg）；Ai—参比物的峰面积；Ais—内标的峰面积；a—校正曲线方程的斜率；b—校正曲线方程的截距。 甘油的质量分数按式（7）计算（11.1.1）： G = (ag × Ag/Ais1 + bg) × Wis1 × 100 / Ws（7） 式中：G—试样中甘油的含量，%（质量分数）；Ag—甘油的峰面积；Ais1—内标1的峰面积；Wis1—内标1的质量（mg）；Ws—试样的质量（mg）；ag—校正曲线方程的斜率；bg—校正曲线方程的截距。 甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯各组分的质量分数按式（8）计算（11.1.2）： CL = (aa × Aai/Ais2 + ba) × Wis2 × 100 / Ws（8） 式中：CL—试样中各脂肪酸甘油酯的含量，%（质量分数）；Aai—每个脂肪酸甘油酯的峰面积；Ais2—内标2的峰面积；Wis2—内标2的质量（mg）；Ws—试样的质量（mg）；aa—单脂肪酸甘油酯、二脂肪酸甘油酯、三脂肪酸甘油酯的校正曲线方程的斜率；ba—单脂肪酸甘油酯、二脂肪酸甘油酯、三脂肪酸甘油酯的校正曲线方程的截距。 总甘油的质量分数按式（9）计算（11.1.3）： 总甘油质量分数 = 游离甘油质量分数 + 键合甘油质量分数（9） 游离甘油质量分数由式（7）求得。 键合甘油质量分数 = Σ(GLm, GLd, GLt) 式中：GLm = 0.2591 × Σ单脂肪酸甘油酯的质量分数（由式（8）求得）；GLd = 0.1488 × Σ二脂肪酸甘油酯的质量分数（由式（8）求得）；GLt = 0.1044 × Σ三脂肪酸甘油酯的质量分数（由式（8）求得）。 报告游离甘油和总甘油的含量，精确至0.001%（质量分数）（11.2）。
质量控制
重复性（12.1）：同一操作者，使用相同仪器，对同一试样测得的两个试验结果之差，不应超过表5所列数值（95%置信水平）。 表5 重复性： | 组分 | 重复性，%（质量分数） | |---|---| | 游离甘油 | 0.001 | | 单脂肪酸甘油酯 | 0.021 | | 二脂肪酸甘油酯 | 0.021 | | 三脂肪酸甘油酯 | 0.032 | | 键合甘油 | 0.008 | | 总甘油 | 0.009 | 偏差（12.2）：由于没有可供测试的标准物质，因此方法的偏差未确定。
引用文件
GB/T 4946 气相色谱法术语（第2章） GB/T 9722 化学试剂—气相色谱法通则（原文作"CB/T9722"，〔待核〕（〔原文不清〕））（第2章）
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